TRF/TR-FRET(HTRF) 개요

Time-Resolved Fluorescence(TRF)

형광의 세기(FI) 측정에는 Nanoseconds 단위로 일시적으로 방출되는 Fluorescein과 같은 표준 Fluorophore를 사용합니다. 샘플의 Excitation과 Emission의 측정은 동시에 발생합니다. Microplate Reader가 방출 측정의 Excitation Light 스크리닝에 매우 우수하지만, Well 또는 샘플에서 시료로부터 방출되는 일시적인 광선으로 인해 Excitation Light는 보통 Background 값이 높습니다.

Time-resolved fluorescence(TRF)는 지속적인 형광을 방출하는 Europium 또는 Terbium과 같은 란탄족 Fluorophore를 이용하여  감소시킵니다. 이러한 지속적인 형광은 Milliseconds 단위 동안이므로, 펄스 광원(예: Flash lamp)을 통한 Fluorophore의 여기 후 지연 및 신호 측정(‘계수 창’)으로 일시적인 형광(나노 초 단위로만 지속)이 측정 전 안정되도록 합니다. Time-Resolved Fluorescence을 이용한 Assay는 크게 증가한 Signal / Noise ratio를 제공합니다. 가장 빈번하게 사용되는 란탄족은 Europium, Terbium, Samarium. 이들은 우수한 신호 강도와 안전성을 가진 Chelate 나 Cryptate 복합체로 흔히 사용됩니다.

 

 

HTRF는 생체분자 상호작용 검출을 위해 Cisbio에서 개발한 다목적 TR-FRET 기술입니다. 일반적인 HTRF assay는 유로퓸 크립테이트를 제공체로, 유기 형광단 d2를 수용체로 사용합니다. 제공체 및 수용체는 후생유전학, 생체표지자 정량화, GPCR 신호전달 등을 포함한 응용 분야에서 다양한 생체분자를 표지하는 데 사용될 수 있습니다. HTRF assay에서는 Cisbio에 의해 인증된 HTRF 호환 가능 TRF 검출 모드를 이용하는 Microplate Reader가 필요합니다.

장점과 고려사항

TRF와 TR-FRET 검출의 핵심 이점은 표준 형광과 비교하였을 때 배경값이 낮고 Signal / Noise ration가 증가하여, 더 높은 민감도를 가지게 된다는 점입니다. 또한, 이 assay는 세척이 필요하지 않은 Robust mix-and-read 형식으로 안정적이며, Screening응용 분야에서 자동화와 축소가 쉽습니다.

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